DAPI
DAPI即4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole),是一種能夠與DNA強力結合的螢光染料,常用於螢光顯微鏡觀測[1]。因為DAPI可以透過完整的細胞膜[2],它可以用于活細胞和固定細胞的染色。
DAPI | |
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IUPAC名 2-(4-Amidinophenyl)-1H-indole-6-carboxamidine | |
别名 | 4',6-Diamidino-2-phenylindole |
识别 | |
CAS号 | 28718-90-3 |
PubChem | 2954 |
ChemSpider | 2848 |
SMILES |
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InChI |
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InChIKey | FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYAH |
ChEBI | 51231 |
性质 | |
化学式 | C16H15N5 |
摩尔质量 | 277.32 g·mol−1 |
若非注明,所有数据均出自一般条件(25 ℃,100 kPa)下。 |
历史
1971年DAPI在一项关于制抗锥虫病的药物的研究中由Otto Dann的实验室首次合成,虽然它不是一种成功的药物,但更深入的研究表明它在与DNA强力结合时发出更强的荧光,因此在1975年它被用在超速离心分析法中以标记线粒体DNA。与DNA结合时激发的强荧光使它被广泛用于荧光显微镜技术中对DNA的染色。上世纪70年代末证实DAPI可以被用来在植物,微生物,多细胞动物和细菌[3]细胞中追踪DNA,1977年证实它可以被用来定量给细胞中的DNA染色,同时也证实DAPI可在流式细胞术中用作DNA染料。[4]
荧光属性
发射与吸收波长
在螢光顯微鏡觀察下,與雙股DNA結合的DAPI染劑在358 nm(紫外线)处有一个最大吸收峰,并在461 nm(蓝)处有一个最大发射峰,其發射光的波長範圍含蓋了藍色至青綠色,因此在荧光显微技术中DAPI被紫外线照亮且被蓝或青色滤镜检出。DAPI也可以和RNA結合,但產生的螢光強度不及與DNA結合的結果,其發射光的波長範圍約在400 nm左右。[5][6][7]
DAPI的發射光為藍色,且DAPI和荧光素、綠色螢光蛋白(Green fluorescent protein, GFP)或Texas Red染劑(紅色螢光染劑)的發射波長,僅有少部分重疊,研究員可以善用這項特性在單一的樣品上進行多重螢光染色。如果需要十分精确的分析,可以使用光谱去混合(spectral unmixing)技術計算此一影响。
活细胞安全性
參考資料
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- Kerenyi, Marc A; Shao, Zhen; Hsu, Yu-Jung; Guo, Guoji; Luc, Sidinh; O'Brien, Kassandra; Fujiwara, Yuko; Peng, Cong; Nguyen, Minh; Orkin, Stuart H. . eLife. 2013-06-18, 2 (2013; 2) [2019-05-11]. PMID 23795291. doi:10.7554/eLife.00633. (原始内容存档于2019-09-24).
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